摘要：本文介紹了采用 Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯用系統檢測氯沙坦鉀中的亞硝胺類雜質 N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸 (NMBA) 的方法。該方法采用常規 ESI 源，即可獲得滿足檢測 要求的分析結果，且方法簡單、特異性高、靈敏度可達 0.005 ppm，大大優于 FDA公 布的*，非常適用于對氯沙坦鉀類產品中的 NMBA 進行快速、準確的定量分析。

前言：2019 年 3 月 1 日，美國食品藥品監督管理局 (FDA) 在[1] 發布公告，對用于治療高血壓 和心力衰竭的多種通用血管緊張素 II 受體阻滯劑 (ARB) 藥品自愿召回。導致此次召回的主 要原因是發現其中含有 NMBA 雜質，這是在 ARB 藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒 性雜質。 NMBA 全稱 N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸 (N-nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid，CAS 號 61445-55-4），結構如圖 1 所示，屬于亞硝胺類遺傳毒性雜質。根據 FDA 初步評估， NMBA 暴露患者的癌癥風險增加似乎與 N-亞硝基二jia胺 (NDMA) 暴露相同，但低于 N-亞硝 基二乙胺 (NDEA) 暴露的風險。FDA 目前給出的 NMBA 可接受*是 96 ng/天，在 ARB 藥物中臨時限度為 0.96 ppm[1]。

關于氯沙坦鉀中 NMBA 的檢測，歐洲 OMCL 實驗室 2019 年 4 月 公布了 LC-MS/MS（APCI 源）方法[2]，FDA 于同年六月份公布了 LC-HRMS 方法和 RapidFire-MS/MS 方法[3,4]，而 FDA 這兩種方法 都不是實驗室常規的定量分析平臺。 本文采用配置了 ESI 源的 Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯用系統 進行 NMBA 檢測。該方法操作簡單、靈敏度高、特異性高且重現 性好，可有效地應用于氯沙坦鉀中 NMBA 的定量分析。

實驗部分：試劑和樣品 甲醇為質譜級，甲酸為色譜級，購于 Merck；所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統現制備的高純去離子水；NMBA 標準 品和樣品由合作用戶提供。 儀器和設備 采用 Agilent 1290 Infinity II 超高效液相色譜系統與 Ultivo 三重四極桿液質聯用系統。液相色譜系統配備如下：二元泵（部件 號 G7120A）、自動進樣器（部件號 G7167B）、柱溫箱（部件號 G7116B）。 色譜柱選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18（2.1 × 100 mm, 2.7 μm，部件號 695775-902）。另據用戶驗證，Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C8（2.1 × 100 mm, 2.7 μm，部件號 695775-906）也可以達到相似的效果。 標準溶液制備 精確稱取 NMBA 標準品，加水超聲溶解，并定量稀釋制成每 1 mL 中含 1 mg 目標化合物的高濃度標準品溶液。用水逐級稀釋 成每 1 mL 中分別包含 0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100 ng 目標化合物的溶液，作為標準品線性系列溶液。線性范圍和相關 濃度點可根據檢測需要自行調整樣品前處理 取氯沙坦鉀樣品約 10 mg，加 1 mL 水，搖勻，超聲溶解。

液相色譜條件： 色譜柱： Poroshell 120 EC-C18, 2.1 × 100 mm, 2.7 μm 流速： 0.4 mL/min 柱溫： 35 °C 流動相： A) 含 0.1% 甲酸的水溶液 B) 甲醇 梯度程序： 時間 (min) B (%) 0.00 5.00 0.50 5.00 2.50 20.00 3.00 98.00 6.00 98.00 6.10 5.00 7.00 5.00 后運行時間： 1 min

結果與討論：色譜分離結果 氯沙坦鉀原料藥體系相對簡單，可采用常規反相色譜體系（C18 或 C8 柱）進行分離。初始高比例水相主要用于洗脫鉀鹽，避免 高濃度鹽的離子抑制效應影響回收率。在本研究中所用的色譜條 件下，NMBA 的保留時間約為 2.3 分鐘。隨后的高比例有機相用 于洗脫氯沙坦。由于氯沙坦濃度很高，為避免污染質譜系統，建 議將流路設置為“引入廢液”。 因為受限制的 N-N 鍵存在順反結構 (syn and anti conformers)[5]， NMBA 在色譜體系中表現為雙峰，本研究中所用的色譜條件可以 實現兩種異構體的基線分離（圖 2）。不過，在 NMBA 定量分析 中，需要對兩個峰積分并合并峰面積[3]。